О методе Гольджи

Описание

Современные методики — метка пероксидазой хрена, внутриклеточное окрашивание проционовым желтым, люциферовым желтым, иммуноцитохимические метки, так же как и Гольджи- электронная микроскопия, значительно дополнили, но одновременно и подтвердили ценность классического метода Гольджи. Например, в новом иммуиоцитохимическом исследовании амакриновых нейронов сетчатки черепахи выявлены различные типы клеток, дана их количественная и качественная оценка, однако авторы отмечают перекрытие отростков разных типов клеток, что препятствует полному их анализу [Eldred, Kartcn, 1983]. Применение метода Гольджи позволяет у одиночно импрегнировапной клетки полностью проследить все ее отростки до мельчайших деталей, шипиков и терминалей. Наиболее ясно сформулировали cBofe отношение к классическому методу Гольджи Famiglietti, Vaughn [1981]. Изучая иммуноцитохимически слоистость во внутреннем плексиформном слое, они заключили, что метод Гольджи единственный и наилучший для создания общей схемы структуры. Новые гистохимические и иммуноцитохимические методики добавляют функциональные характеристики к основным морфологическим фактам.

Часто высказывавшееся сомнение в плодотворности методики Гольджи вынудило ряд ученых выступить с защитой этого метода [Школьник-Яррос, 1963, 1965а; Scheibel М., Scheibеl А., 1968; Szentagothai, 1975; и др.]. В частности, импрегнация сетчатки дает большой материал в этом плане, именно на этом объекте недавно обнаружены совершенно новые типы нейронов с необычными отростками и связями [Mariani, 1982а; 1985], а также получены подтверждения о том, что шипики и пуговки представляют собой пре- и постсипаптичсские отделы синапсов. Если до последних лет можно было лишь косвенно судить о том, что ожерелье пуговок по ходу тонкого отростка представляет собой синаптические образования прежде всего по работам Gray [1959], то в настоящее время Гольджи-электронно-микроскопические исследования дают бесспорные доказательства этому [Le Vay, 1973].
[banner_centerrs] {banner_centerrs} [/banner_centerrs]

Прослеживая терминальные образованиия дендритов и аксонов, делая ультратонкие срезы с импрегнированных серебром кусочков, удалось не только проследить ход и подтвердить локализацию терминален отростков биполярных и горизонтальных клеток сетчатки, увидеть их постсинаптическое расположение в фоторецепторах, по и подсчитать количество таких сииапсов от одного отростка [Stell, 1967; Kolb, 1970, 1974; Boycott, Kolb, 1973b]. Гольджи-электронно-микроскопический анализ, подтверждая еще раз синаптическую природу шипиков, пуговок, варикозностей по ходу и па концах отростков, по существу венчает собой период возрождения метода Гольджи. Волна этого второго подъема, возникшая еще в 1937 г. в лаборатории Г. И. Полякова в Москве, постепенно захватила весь мир, включая Южную Америку [например, Parthe, 1972, 1982]. История применения метода Гольджи, его значение и блестящие перспективы подтверждены па симпозиуме, посвященном 100-летию «черной реакции Гольджи», прошедшем в Милане в 1973 г. [Szenthagothai, 1975].

Можно думать, что увиденные при импрегнации по Гольджи весьма существенные отличия синаптических образований у разных типов нейронов в коре мозга [Поляков, 1953, 1973; Школьник-Яррос, 1965а, б; 1968 6], в подкорковых [Леонтович, 1958, 1978], стволовых [Жукова, 1961, 1977] образованиях и в сетчатке лягушки, белки и кошки отражают истинные картины.

На классических зарисовках сетчатки Ramon у Cajal [1972] эти различия типов нейронов и их отростков выявляются очень четко, хотя они ц не отмечены в тексте. Так, например, наиболее множественны синаптические образования в виде пуговок по ходу отростков, шипиков и небольших овальных утолщений у однослойных ганглиозных клеток 4-го подслоя внутреннего плексиформного слоя сетчатки лягушки. Варикозности по ходу дендритных ветвлений, крупные пуговки на терминалях и редкие единичные шипики видны на зарисовках гигантской однослойной клетки второго подслоя и гигантской двухслойной клетки. Разнообразные синапсы с отчетливыми головками и образованием «корзинок» запечатлены на рисунке трехслойной клетки. На чрезвычайно топких ветвлениях малых двухслойных и малых диффузных клеток синапсы на рисунках Ramon у Cajal не отражены.

Наши наблюдения позволяют подтвердить данные Ramon у Cajal о множестве синапсов в отношении густоветвистых кустовидных ганглиозных клеток 4-го подслоя в сетчатке лягушки. Подобные клетки и в сетчатке кошки также весьма богаты синаптическими образованиями. Сходные нейроны 3-го подслоя в сетчатке лягушки тоже обильно снабжены бутонами. Редковетвистые кустовидные клетки 1-го и 2-го подслоев часто имеют гладкие дендриты, но более мелкие их варианты характеризуются большим набором разных синапсов преимущественно на концах дендритных ветвлений.

Наибольшее количество синаптических образований, когда отростки буквально усыпаны ими, выявлено нами у различного рода диффузных клеток сетчатки лягушки Rana temporaria, не описанных Ramon у Cajal, как-то: диффузных с нежным ветвлением, переходных кустовидно-диффузных. Иногда обнаруживаются нейроны, отростки которых еле различимы даже при больших увеличениях, и только пуговки в виде как бы нежной цепочки бусинок позволяют наметить направление отростка.

В сетчатке кошки у малых ганглиозных клеток с широким размахом дендритов (у-клетки) наблюдаются небольшие шипики, покрывающие все отростки (рис. 90, Б).



Этот характерный признак подтвержден Boycott, Wassle [1974] для клеток типа у. На рис. 81



сетчатки белки запечатлены два нейрона с чрезвычайно различными деидритами. Отростки широкоразмашистой клетки бедны синаптическими образованиями, у диффузной же клетки множество шипиков и пуговок.

Следовательно, как зарисовки Ramon у Cajal, так и наш материал импрегнированной серебром по Гольджи сетчатки позволяет сделать заключение о соответствии синаптического набора типу ганглиозной клетки. В других отделах центральной нервной системы, как указано выше, подобная закономерность известна очень давно [Леонтович, 1958; Leontovich, 1975; Школьник-Яррос, 1950, 1965а].

В детальных исследованиях, специально посвященных структуре дендритных шипиков нейронов коры мозга черепах [Давыдова, Гончарова, 1977], не только подтверждается полная идентичность светооптической и электронно-микроскопической картин этих образований, но и дается сравнительная морфология шипиков. Так, вновь установлены закономерности различий в строении и расположении шипиков на разных уровнях апикальных дендритов корковых нейронов черепах. Как правило', дендритные шипики проксимальных отделов дендрита были чаще короткими и не имели головок. Шипики дистальных отделов дендритов характеризовались наиболее длинной ножкой и хорошо выраженной головкой. Плотность расположения шипиков возрастала от проксимальных к дистальным отделам дендритов. Обнаружены кисточко-шипиковые синаптические комплексы, специфичные для коры мозга черепах [Давыдова, Гончарова, 1977; Davydova, Goncharova, 1979]. Весьма интересны новые факты о видовых различиях дендритных шипиков. У степной черепахи они беднее органеллами, чем у болотной. В дистальных отделах дорсальной коры количество митохондрий в головках шипиков в 2 раза больше у степной черепахи, чем у болотной. Таким образом, тонкая структура синаптического аппарата нейрона оказалась зависящей от экологических особенностей этих двух видов черепах. Доказано также, что шипики уменьшаются в размерах, изменяется их форма и, наконец, они полностью исчезают при патологических процессах [Попова, 1975], при деафферентации [Globus, Scheibel, 1966; Valverde, 1967].

----

Статья из книги: Нейроны сетчатки | Е.Г. Школьник-Яррос, А.В. Калинина